甲型肝炎病毒

甲型病毒性肝炎是一种人类传染病，其主要特征是肝脏损害，临床表现为中毒和黄疸。甲型肝炎病毒于1973年由S. Feinstone等人利用免疫电子显微镜技术通过感染猴子（黑猩猩和狨猴）发现。免疫电子显微镜技术的核心是将特异性抗体（恢复期血清）添加到甲型肝炎患者粪便滤液中，然后将沉淀物放入电子显微镜下观察。由于病毒与特异性抗体相互作用，它们会发生特异性聚集。在这种情况下，它们更容易被检测到，并且在抗体作用下的聚集证实了病原体的特异性。S. Feinstone的发现在志愿者实验中得到了证实。

甲型肝炎病毒呈球形，病毒体直径为27纳米。基因组为单链正RNA，长2.6毫米，无超衣壳。对称类型为立方-二十面体。衣壳由4个多肽（VP1-VP4）组成，有32个衣壳粒。根据其特性，甲型肝炎病毒属于小核糖核酸病毒科（Picornaviridae）的肝病毒属（Heparnovirus）。就抗原而言，甲型肝炎病毒（HAV - 甲型肝炎病毒）是均质的。HAV在黑猩猩、狒狒、阿拉伯狒狒和狨猴体内繁殖良好。长期以来，该病毒无法培养。直到20世纪80年代才有可能获得HAV繁殖的细胞培养物。最初，出于这些目的使用恒河猴胚胎肾脏的连续细胞系（培养物 FRhK-4），现在使用绿猴肾细胞的连续细胞系（培养物 4647）。

根据世界卫生组织专家的建议，目前已采用如下甲型肝炎病毒标志物的命名法：甲型肝炎病毒-HAV抗体：抗-HAV IgM和抗-HAV IgG。

HAV是一种直径为27-30纳米的小颗粒，具有二十面体对称性和均质性。使用免疫聚集法获得的电子图谱显示，其电子致密颗粒具有位于表面且对称排列的衣壳粒。在负片显影下，制剂中可见实心和空心颗粒。与流感病毒不同，HAV的核衣壳没有表面突起和膜。同样重要的是，HAV病毒体不具有心形结构。

根据其物理化学特性，甲型肝炎病毒被归类为小核糖核酸病毒科，肠道病毒属，序列号为72。然而，这种分类法被证明过于不寻常，世界卫生组织认为可以保留“甲型肝炎病毒”这一术语。

与所有小核糖核酸病毒科病毒一样，甲型肝炎病毒含有核糖核酸。一些实验室已经证明了克隆甲型肝炎病毒基因组的可能性，这为研制疫苗开辟了前景。

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甲型肝炎病毒耐药性

该病毒对高温、酸、脂肪溶剂（不含脂质）和消毒剂具有较高的耐受性，并且对低温具有良好的耐受性。所有这些都有助于其在外部环境中长期存活。在室温下，它可存活数周；在60°C下，它会在4-12小时后部分丧失传染性；在85°C下，几分钟后就会完全丧失传染性。它对氯具有很强的耐受性，因此能够穿透水处理设施的屏障渗透到自来水中。

总结所有数据，我们可以对甲型肝炎病毒进行如下描述：

• 自然宿主是人类；
• 实验动物——狨猴、黑猩猩；
• 传染源是粪便；
• 该疾病具有流行性和地方性；
• 传播途径：粪口；
• 潜伏期-14-40天；
• 向慢性肝炎的转变 - 未观察到。

HAV的免疫学特性如下：

• 原型菌株 - Ms-1、CR-326、GВG。所有菌株在免疫学上均相似或相同；
• 抗体-IgM和IgG，是在病毒结构蛋白的引入后产生的，具有保护作用；
• 一、人血清丙种球蛋白的保护作用——在感染前或潜伏期注射，可预防或减轻疾病。

NAU的物理化学特性如下：

• 形态：无壳球形颗粒，立方体对称，衣壳由32个衣壳粒组成；
• 直径-27-30纳米；
• CsCl 中的密度（g/cm3）——1.38-1.46（开放颗粒），1.33-1.34（成熟病毒体），1.29-1.31（未成熟病毒体，空颗粒）；
• 沉降系数-156-160成熟病毒体；
• 核酸是单链线性RNA；
• 相对分子量-2.25×106-2.8×106KD；
• 核苷酸数目为6,500-8,100。

HAV在物理和化学影响下的稳定性如下：

• 氯仿、乙醚——稳定；
• 氯，0.5-1.5 mg/l，5 °C，15分钟 - 部分失活；
• 氯胺，1g/l，20℃，15分钟——完全失活；
• 福尔马林，1:4000，35-37°C，72小时 - 完全失活，1:350，20°C，60分钟 - 部分失活。

温度：

• 20-70℃——稳定；
• 56℃，30分钟——稳定；
• 60°C，12小时——部分失活；
• 85°C，1分钟——完全失活；
• 高压灭菌，120°C。20分钟-完全失活；
• 干热，180°C，1小时——完全失活；
• UFO，1.1 W，1 分钟 - 完全失活。

数据显示，甲型肝炎病毒的理化特性与肠道病毒最为接近。与其他肠道病毒一样，甲型肝炎病毒对多种消毒剂具有抗性，在85°C高温和高压灭菌条件下几分钟内即可完全灭活。

已证实甲型肝炎病毒可在人和猴细胞培养的原代和连续单层细胞系中复制。以病猴肝脏提取物为起始材料，在体外培养中观察到甲型肝炎病毒的活跃复制。然而，需要注意的是，在所有关于甲型肝炎病毒体外复制的实验中，都应注意原代传代期间的较长潜伏期（长达4-10周），随后病毒遗传物质的积累虽然有所增加，但绝对值仍然非常低，这导致许多研究人员认为甲型肝炎病毒在组织培养中复制不完全。

总结关于甲型肝炎病毒在组织外培养中复制的文献数据，可以说甲型肝炎病毒在体外长期存活的事实毋庸置疑。目前尚未最终确定稳定高水平病毒复制的最佳条件，这阻碍了其生物学特性的研究，以及诊断试剂生产和疫苗设计的试剂来源。

与此同时，在文献中可以找到关于这个问题的更乐观的判断。解决与甲型肝炎病毒培养有关的所有问题都是不久的将来的事情。在研究恒河猴胚胎肾细胞培养中甲型肝炎病毒（HAV）繁殖的最佳条件时，确定了两个阶段：感染性病毒的生产阶段（在第5代水平上长达6-8天）和病毒抗原的密集积累阶段。研究还表明，病毒抗原的最显著积累发生在所谓的滚筒培养（旋转烧瓶）条件下。这种方法为大量获取培养抗原开辟了广阔的机会，并因此将出现用于制备诊断系统和生产疫苗的原料。

甲型肝炎流行病学

甲型肝炎病毒对人类具有高致病性。根据世界卫生组织（1987年）的数据，仅感染一个病毒体就足以致病。然而，实际感染剂量可能要高得多。唯一的传染源是感染者。病毒会在黄疸出现前12-14天以及黄疸期的3周内随粪便大量排出。在黄疸型、无黄疸型和无症状型甲型肝炎患者中，病原体排泄情况无显著差异。感染途径为粪口传播，主要通过水传播，也可通过家庭和食物传播。感染途径为粪口传播，主要通过水传播，也可通过家庭和食物传播。病毒的主要传播途径是水传播。也可能通过空气飞沫传播。人群普遍易感，受影响的主要是14岁以下儿童。该病有明显的秋冬季节特征。

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甲型肝炎的症状

潜伏期根据病毒感染程度不同，从15天到50天不等，平均为28-30天。甲型肝炎病毒进入人体后，会在局部淋巴结中增殖，然后进入血液，最终进入肝细胞，引发急性弥漫性肝炎，并伴有肝细胞和网状内皮细胞的损伤，以及肝脏解毒和屏障功能的下降。肝细胞损伤并非由病毒直接作用引起，而是由免疫病理机制引起的。甲型肝炎最典型的症状是急性黄疸周期性发作：潜伏期、前驱期（黄疸前期）、黄疸期和恢复期。然而，在感染灶中，可以检测到大量无黄疸和无症状感染的患者，这类患者的数量明显多于黄疸患者（“冰山现象”）。

感染后的免疫力强大而持久，这是由病毒中和抗体和免疫记忆细胞引起的。

甲型肝炎的微生物学诊断

甲型肝炎的诊断（除黑猩猩、狨猴、狒狒等动物感染外，我们没有这些动物）基于各种免疫学方法：RSC、免疫荧光法、免疫粘附血凝试验（病毒抗原+抗体复合物在补体存在下吸附于红细胞并使其粘附）。然而，由于缺乏特异性病毒抗原，这些方法的应用受到限制，而且免疫荧光反应需要肝活检，这是不理想的。免疫电子显微镜法可靠且特异，但非常耗费人力。因此，迄今为止唯一可接受的免疫学反应是采用IFM或RIM形式的固相免疫吸附分析法，尤其是在改进M类免疫球蛋白的“捕获”方法时。在我国，已提出了一种用于此目的的测试系统——“DIAGN-A-HEP”。该测试系统的工作原理如下。首先，将M类免疫球蛋白抗体（抗免疫球蛋白M）吸附在聚苯乙烯孔壁上，然后加入待测患者血清。如果血清中含有IgM抗体，它们会与M类抗抗体结合。然后加入一种特定的病毒抗原（甲型肝炎病毒），该抗原是通过细胞培养获得的。清洗系统，并加入辣根过氧化物酶标记的抗病毒抗体。如果系统的所有四个成分相互作用，则形成一个四层“三明治”结构：

• 抗免疫球蛋白M，
• 免疫球蛋白M（针对甲型肝炎病毒 - 在所研究的患者血清中），
• 病毒抗原，
• 酶标记的抗病毒抗体。

为了检测这种复合物，需要将酶的底物添加到孔中。在酶的作用下，底物被破坏，并形成有色产物。颜色的强度可以用分光光度计或光比色计定量测量。

IgM“捕获”法的优势在于，这类免疫球蛋白的抗体在原发免疫反应中出现，提示感染处于活跃期，感染后会消失。相反，IgG类抗病毒抗体在感染后会持续存在很长时间，从而提供获得性免疫。目前已提出一种DNA探针法检测甲型肝炎病毒：使用互补vRNA DNA作为探针。

甲型肝炎的治疗

由于病毒性肝炎时干扰素的产生受到干扰，因此甲型肝炎的治疗基于使用干扰素及其内源性合成的诱导剂阿米辛。

甲型肝炎的具体预防

此前广泛使用的丙种球蛋白血清预防甲型肝炎的方法并不奏效，因此主要重点放在疫苗预防上，并开展甲型肝炎疫苗接种。为此，各种疫苗正在研发中，并已投入使用。俄罗斯早在1995年就研制出了一种有效的甲型肝炎疫苗，目前仍在成功使用。