霍乱弧菌

据世界卫生组织介绍，霍乱是一种传染病，其特征是急性、严重、脱水性腹泻，粪便呈米水状，是由霍乱弧菌感染引起的。由于霍乱具有极强的流行病传播能力、病程严重、死亡率高的特点，因此被认为是一种极其危险的传染病。

霍乱的历史发源地是印度，更准确地说是恒河和雅鲁藏布江三角洲地区（现为东印度和孟加拉国），霍乱自古以来就存在（早在公元前 500 年，这一地区就发现了霍乱疫情）。这里长期存在霍乱疫源地的原因有很多。霍乱弧菌不仅能在水中存活很长时间，而且在有利条件下（高于 12°C 的水温和存在有机物）还能繁殖。所有这些条件在印度都很明显：热带气候（年平均气温为 25 至 29°C），降雨充沛且沼泽遍布，人口密度高，尤其是在恒河三角洲地区，水中含有大量有机物，污水和粪便常年持续污染水体，物质生活水平低下，居民有独特的宗教和崇拜仪式。

霍乱流行的历史可以分为四个时期。

第一阶段 - 直到 1817 年，霍乱仅集中在东亚和南亚，主要在印度，并没有蔓延到境外。

第二阶段——1817年至1926年。随着印度与欧洲及其他国家建立广泛的经济及其他联系，霍乱走出印度，并沿着经济和宗教联系的路线蔓延，引发了六次大流行，夺走了数百万人的生命。俄罗斯是霍乱最早传入的欧洲国家。从1823年到1926年，俄罗斯经历了57年的霍乱。在此期间，超过560万人感染霍乱，214万人（占40%）死亡。

第三阶段——1926年至1961年，霍乱再次成为其主要疫源地，随后一段相对平稳的时期开始了。随着现代化饮用水净化系统、废水处理和消毒系统的发展，以及包括检疫服务在内的特殊防霍乱措施的制定，世界各国似乎能够可靠地避免霍乱再次入侵。

第四次大流行始于1961年，一直持续至今。第七次大流行并非始于印度，而是始于印度尼西亚，并迅速蔓延至菲律宾、中国、印度支那国家，进而蔓延至亚洲、非洲和欧洲的其他国家。此次大流行的特点包括：首先，它是由霍乱弧菌的一种特殊变体——埃尔托霍乱弧菌（V. cholerae eltor）引起的，这种弧菌直到1961年才被正式认定为霍乱的病原体；其次，就持续时间而言，它超过了以往所有大流行；第三，它分为两波，第一波持续到1990年，第二波始于1991年，覆盖了南美洲和北美的许多国家，包括美国，而美国自1866年以来从未发生过霍乱疫情。从1961年到1996年，146个国家共有3,943,239人感染霍乱。

霍乱的病原体霍乱弧菌是1883年R. Koch在第五次大流行期间发现的，但这种弧菌最早是在1854年由F. Pacini在腹泻患者的粪便中发现的。

霍乱弧菌属于弧菌科，该科包含多个属（弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发光杆菌属）。自1985年以来，弧菌属已拥有超过25个种，其中对人类最重要的有霍乱弧菌、副溶血性弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌和河流弧菌。

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弧菌属的主要特征

短的、无孢子和荚膜形成的、弯曲或直的革兰氏阴性杆菌，直径0.5 µm，长1.5-3.0 µm，能运动（霍乱弧菌为单毛菌，一些种类有两根或两根以上极生鞭毛）；在常规培养基中生长良好且快速，是化能有机营养菌，发酵碳水化合物产生酸而不产气（葡萄糖通过Embden-Meyerhof途径发酵）。氧化酶阳性，形成吲哚，将硝酸盐还原为亚硝酸盐（霍乱弧菌的亚硝基吲哚反应呈阳性），分解明胶，通常进行Voges-Proskauer反应（即形成乙酰甲基甲醇），无脲酶，不形成H2S，有赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶，但没有精氨酸二水解酶。弧菌属（Vibrio）的一个特征是大多数菌株对药物0/129（2,4-二氨基-6,7-重氮丙基蝶啶）敏感，而假单胞菌科和肠杆菌科的代表菌株对该药物具有抗性。弧菌是需氧菌和兼性厌氧菌，最适生长温度为18-37℃，pH值为8.6-9.0（在pH值6.0-9.6范围内生长），一些种类（嗜盐菌）在无NaCl条件下无法生长。DNA中G+C含量为40-50摩尔%（霍乱弧菌约为47摩尔%）。生化测试用于区分弧菌科与形态相似的气单胞菌属和邻单胞菌属，以及肠杆菌科。

霍乱弧菌与假单胞菌科的不同之处在于，霍乱弧菌仅通过 Embden-Meyerhof 途径发酵葡萄糖（无需 O2 参与），而前者仅在有 O2 的情况下消耗葡萄糖。它们之间的这种差异在 Hugh-Leifson 培养基上很容易显现出来。该培养基含有营养琼脂、葡萄糖和指示剂。使用 Hugh-Leifson 培养基，接种在两列中，其中一列装有凡士林（以创造厌氧条件）。如果是霍乱弧菌生长，则两个试管中的培养基颜色都会发生变化，如果是假单胞菌生长，则只在没有凡士林的试管中发生变化（需氧生长条件）。

霍乱弧菌对培养基的要求不高。它在含有0.5-1.0% NaCl的1%碱性（pH 8.6-9.0）蛋白胨水（PV）中繁殖良好且快速，生长速度超过其他细菌。为了抑制变形杆菌的生长，建议在1% PV中添加亚碲酸钾（最终稀释度为1:100,000）。1% PV是霍乱弧菌的最佳增菌培养基。在生长过程中，6-8小时后，它会在PV表面形成一层细腻、疏松的灰色薄膜，摇晃后很容易被破坏并以薄片形式沉到底部，PV变得中度浑浊。目前已提出了各种用于分离霍乱弧菌的选择性培养基：碱性琼脂、胆盐琼脂、碱性蛋白酸盐、含血碱性琼脂、乳糖-蔗糖和其他培养基。最佳培养基是TCBS（硫代硫酸盐柠檬酸盐-溴百里酚蔗糖琼脂）培养基及其改良培养基。然而，最常用的是碱性MPA培养基，霍乱弧菌在其上形成光滑、玻璃状透明、略带蓝色、粘稠的圆盘状菌落。

当将弧菌注射到明胶柱中时，在 22-23°C 的温度下放置 2 天后，弧菌会从表面开始液化，形成气泡，然后形成漏斗状，最后逐层液化。

在牛奶中，弧菌迅速繁殖，24-48小时后引起牛奶凝固，然后牛奶发生胨化，3-4天后，由于牛奶pH值向酸性转变，弧菌死亡。

B. Heiberg 根据其发酵甘露糖、蔗糖和阿拉伯糖的能力，将所有弧菌（霍乱弧菌和类霍乱弧菌）分为若干组，现将组数增加到 8 组。

霍乱弧菌属于海伯格弧菌第一组。

在形态、培养和生化特征上与霍乱弧菌相似的弧菌过去和现在都有不同的名称：副霍乱弧菌、类霍乱弧菌、NAG弧菌（非凝集性弧菌）；不属于O1群的弧菌。最后一个名称最准确地强调了它们与霍乱弧菌的关系。根据A. Gardner和K. Venkat-Raman的研究，霍乱弧菌和类霍乱弧菌具有共同的H抗原，但O抗原不同。根据O抗原，霍乱弧菌和类霍乱弧菌目前分为139个O血清群，但其数量正在不断增加。霍乱弧菌属于O1群。它具有一个共同的A抗原和两种特异性抗原——B和C，霍乱弧菌的三种血清型由此区分：小川血清型（AB）、稻叶血清型（AC）和彦岛血清型（ABC）。分离期的霍乱弧菌具有OR抗原。因此，O血清、OR血清以及特异性血清稻叶和小川可用于霍乱弧菌的鉴别。

1992-1993年，孟加拉国、印度、中国、马来西亚等国爆发霍乱疫情，病原体是一种新的、此前未知的霍乱弧菌血清型。该血清型与O1群霍乱弧菌的抗原特征不同：它具有O139抗原和多糖荚膜，并且不与任何其他O1群血清凝集。其所有其他形态学和生物学特性，包括致霍乱能力（即合成外毒素——霍乱原）均与O1群霍乱弧菌相似。因此，一种新的霍乱病原体——O139群霍乱弧菌，似乎是由于O抗原发生突变而产生的。它被命名为孟加拉霍乱弧菌O139。

所谓的霍乱样弧菌与霍乱弧菌之间的关系长期以来一直不明。然而，通过对霍乱弧菌和霍乱样弧菌（NAG弧菌）70多个特征的比较，发现它们有90%的相似性，且霍乱弧菌与所研究的NAG弧菌的DNA同源性程度为70%-100%。因此，霍乱样弧菌与霍乱弧菌被归为一个物种，它们与霍乱弧菌的主要区别在于O抗原，因此被称为非01组弧菌——非01组霍乱弧菌。

霍乱弧菌分为 4 个生物型：霍乱弧菌、埃尔托弧菌、变形弧菌和白氏弧菌。埃尔托弧菌的性质多年来一直备受争议。1906 年，F. Gottschlich 在埃尔托检疫站从一名死于痢疾的朝圣者的尸体中分离出了这种弧菌。F. Gottschlich 分离出了几种这样的菌株。它们在所有特性上都与霍乱弧菌无异，并能与霍乱 O 血清凝集。然而，由于当时朝圣者中还没有霍乱病例，而且人们认为长期携带霍乱弧菌的可能性不大，因此埃尔托弧菌是否是霍乱的病原体长期以来一直存在争议。此外，与霍乱弧菌不同，埃尔托弧菌有溶血作用。然而，1937 年，这种弧菌在苏拉威西岛（印度尼西亚）引发了一场大规模严重的霍乱疫情，死亡率超过 60%。最终，在 1961 年，它成为第七次大流行的罪魁祸首，1962 年其霍乱性质的问题终于得到解决。霍乱弧菌和埃尔托弧菌之间的区别仅涉及一些特性。在所有其他特性方面，埃尔托弧菌与霍乱弧菌并无根本区别。此外，现已确定，变形弧菌生物型（芬克勒普赖里弧菌）包括除 01 组（现在是 0139 组）之外的所有弧菌组，该组以前称为 NAG 弧菌。阿本西斯弧菌生物型是从易北河中分离出来的，具有发磷光的能力，但已失去这种能力，因此与变形弧菌无异。根据这些数据，霍乱弧菌目前分为 4 个生物型：霍乱弧菌 01 型、霍乱弧菌埃尔托型、霍乱弧菌 0139 孟加拉型和非 01 型霍乱弧菌。前三个属于 01 和 0139 两个血清型。最后一个生物型包括以前的生物型霍乱弧菌和白化弧菌，并以许多其他不与 01 和 0139 血清凝集的弧菌血清型为代表，即 NAG 弧菌。

霍乱弧菌的致病因素

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霍乱弧菌的趋化性

借助这些特性，霍乱弧菌能够与上皮细胞相互作用。霍乱弧菌突变体（丧失了趋化能力）的毒力显著降低；而暴动弧菌突变体（丧失了移动能力）的毒力则完全消失或急剧下降。

黏附因子和定植因子是弧菌黏附于小肠微绒毛并定植于小肠黏膜的途径。黏附因子包括黏液酶、可溶性血凝素/蛋白酶、神经氨酸酶等。它们通过破坏黏液中的物质来促进黏附和定植。可溶性血凝素/蛋白酶促使弧菌脱离上皮细胞受体，并从肠道排出到外界环境，从而导致其流行性传播。神经氨酸酶增强霍乱原与上皮细胞之间的结合，促进毒素渗透到细胞内，从而加重腹泻。

霍乱毒素是一种霍乱原。

所谓的新型毒素能够引起腹泻，但与霍乱原没有遗传或免疫学关系。

皮肤神经性和出血性因素。这些毒性因素的性质及其在霍乱发病机制中的作用尚未得到充分研究。

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霍乱弧菌内毒素

霍乱弧菌的脂多糖具有很强的内毒性，可引起全身中毒。

霍乱弧菌的主要致病因子是外毒素霍乱原（CTX AB），它决定了该疾病的发病机制。霍乱分子由两个片段组成 - A 和 B。片段 A 由两个肽 - A1 和 A2 组成，它具有霍乱毒素的特异性，并使其具有超抗原的特性。片段 B 由 5 个相同的亚基组成。它执行两项功能：1）识别肠细胞的受体（单唾液酸神经节苷脂）并与其结合；2）形成膜内疏水通道，供亚基 A 通过。肽 A2 负责结合片段 A 和 B。实际的毒性功能由肽 Aj（ADP-核糖基转移酶）执行。它与 NAD 相互作用，导致其水解；产生的 ADP-核糖与腺苷酸环化酶的调节亚基结合。这导致GTP水解被抑制。由此产生的GTP +腺苷酸环化酶复合物引起ATP水解，并形成cAMP。（cAMP积累的另一个途径是霍乱原抑制将cAMP水解为5-AMP的酶）。编码外毒素合成的ctxAB基因的功能发挥依赖于许多其他致病基因的功能，特别是tcp基因（编码毒素控制的粘附菌毛-TCAP的合成）、调控基因toxR、toxS和toxT、hap基因（可溶性血凝素/蛋白酶）和神经氨酸酶基因。因此，霍乱弧菌致病性的遗传控制非常复杂。

事实证明，霍乱弧菌的染色体上存在两个致病岛。其中一个是丝状中等转化噬菌体CTXφ的基因组，另一个是同样丝状中等转化噬菌体VPIcp的基因组。每个致病岛都包含前期特异的基因盒，这些基因盒决定了霍乱病原体的致病性。CTXφ原噬菌体携带CTX基因、新毒素zot和ace的基因、ser基因（粘附素合成）以及ortU基因（合成功能未知的产物）。该基因盒还包含nei基因和RS2噬菌体区，该区编码原噬菌体的复制和整合到染色体中。当原噬菌体从病原体染色体中分离出来时，zot、ace和ortU基因是噬菌体病毒体形成所必需的。

VPIcp 原噬菌体携带 tcp 基因（编码菌毛（TCPA 蛋白）的产生）、toxT、toxR、act 基因（附加定殖因子、移动基因（整合酶和转座酶））。毒力基因的转录受三个调控基因调控：toxR、toxS 和 toxT。这些基因在转录水平上协同改变 20 多个毒力基因的活性，包括 ctxAB、tcp 和其他基因。主要调控基因是 toxR 基因。该基因的损伤或缺失会导致无毒力或使霍乱毒素 CTX 和 TCPA 的产生减少 100 倍以上。也许，这就是温和转化噬菌体形成的致病岛和其他细菌物种中毒力基因协调表达的调控方式。已经确定埃尔托霍乱弧菌的染色体中存在另一种原噬菌体 K139，但其基因组研究甚少。

Hap基因位于染色体上。因此，霍乱弧菌的毒力（致病性）和流行能力由ctxAB、tcp、toxR和hap四个基因决定。

可以使用各种方法来检测霍乱弧菌产生霍乱原的能力。

兔子生物学试验。将霍乱弧菌肌肉注射到哺乳兔（年龄不超过2周）体内后，兔子会出现典型的霍乱症状：腹泻、脱水和死亡。

通过PCR、IFM或被动免疫溶血反应直接检测霍乱原（霍乱原与红细胞的Gmj结合，在加入抗毒抗体和补体后溶解）。然而，仅检测产毒能力不足以确定此类菌株的流行危险性。为此，需要检测hap基因的存在，因此，区分01群和0139群霍乱弧菌的产毒株和流行株的最佳和最可靠的方法是通过PCR，使用特异性引物检测所有4种致病基因：ctxAB、tcp、toxR和hap。

除 01 或 0139 血清群以外的霍乱弧菌之所以能够引起人类散发性或丛集性腹泻疾病，可能是由于存在 LT 或 ST 型肠毒素（它们分别刺激腺苷酸或鸟苷酸环化酶系统），或者仅存在 ctxAB 基因而没有 hap 基因。

在第七次大流行期间，分离出了不同毒力的霍乱弧菌菌株：产霍乱弧菌（毒性）、弱产霍乱弧菌（低毒力）和非产霍乱弧菌（无毒力）。非产霍乱弧菌通常具有溶血活性，不会被霍乱诊断噬菌体HDF(5)裂解，也不会导致人类患病。

为了对霍乱弧菌01型（包括埃尔托弧菌）进行噬菌体分型，S. Mukherjee提出了几套噬菌体，后来在俄罗斯又补充了其他噬菌体。一套这样的噬菌体（1-7）可以区分霍乱弧菌01-16型的不同噬菌体类型。为了鉴定产毒和非产毒的埃尔托弧菌，俄罗斯现在建议使用噬菌体CTX*（溶菌产毒埃尔托弧菌）和CTX"（溶菌不产毒埃尔托弧菌），而不是HDF-3、HDF-4和HDF-5。

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霍乱病原体的耐药性

霍乱弧菌在低温下生存能力强，在冰块中可存活1个月，在海水中可存活47天，在河水中可存活3-5天至数周，在煮沸的矿泉水中可存活1年以上，在土壤中可存活8天至3个月，在新鲜粪便中可存活3天，在煮熟的食物（米、面条、肉、粥等）中可存活2-5天，在生蔬菜中可存活2-4天，在水果中可存活1-2天，在牛奶和奶制品中可存活5天；冷藏时，霍乱弧菌存活期可增加1-3天；在被粪便污染的亚麻布上可存活2天，在潮湿物质中可存活一周。霍乱弧菌在80℃下5分钟内死亡，在100℃下立即死亡；对酸极为敏感；在氯胺和其他消毒剂的作用下，它们会在5-15分钟内死亡。它们对干燥和阳光直射敏感，但能长期良好地存活，甚至在富含有机物、pH值呈碱性、温度高于10-12°C的开放水体和废水中也能繁殖。它们对氯高度敏感：在30分钟内，向水中加入0.3-0.4毫克/升的活性氯，就能有效杀灭霍乱弧菌。

不属于霍乱弧菌种的对人类致病的弧菌

弧菌属包括 25 多个种，其中除霍乱弧菌外，至少有 8 种可致人患病：副溶血性弧菌、溶藻性弧菌、创伤性弧菌、河流性弧菌、烟酸弧菌、拟态弧菌、美人鱼弧菌和霍利弧菌。这些弧菌均栖息于海洋和海湾。感染可通过游泳或食用海鲜发生。已发现霍乱弧菌和非霍乱弧菌不仅可引起胃肠炎，还可引起伤口感染。霍乱弧菌 O1 组和非 O1 组、副溶血性弧菌、溶藻性弧菌、拟态弧菌、美人鱼弧菌和创伤性弧菌均具有这种能力。当软组织被海洋动物的壳损伤或直接接触受感染的海水时，它们会引起软组织炎症。

在列出的致病非霍乱弧菌中，最有实际意义的是副溶血性弧菌、溶藻性弧菌、创伤性弧菌和河流弧菌。

副溶血性弧菌（V. parahaemolyticus）是一种副溶血性弧菌，于1950年在日本因食用半干沙丁鱼（死亡率为7.5%）而引发的大规模食物中毒事件中首次分离出来。1963年，R. Sakazaki将病原体归类为弧菌属。他将研究的菌株分为两个种：副溶血性弧菌和溶藻性弧菌。这两个种均存在于沿海海水及其栖息生物中，它们均为嗜盐菌（希腊语hals，意为盐）；与普通弧菌不同，嗜盐弧菌在不含氯化钠的培养基中无法生长，在高浓度氯化钠的培养基中也能良好繁殖。嗜盐弧菌的种属归属取决于其发酵蔗糖、生成乙酰甲基甲醇以及在含10%氯化钠的PV中繁殖的能力。所有这些特征都是溶藻弧菌所固有的，但副溶血弧菌却不具备。

副溶血性弧菌有三种抗原：热不稳定的鞭毛 H 抗原、热稳定性 O 抗原（加热至 120°C 2 小时也不会破坏）和表面 K 抗原（加热会破坏）。新鲜分离的副溶血性弧菌培养物具有明确的 K 抗原，可保护活弧菌不被同源 O 血清凝集。所有菌株的 H 抗原均相同，但单毛弧菌的 H 抗原与周毛弧菌的 H 抗原不同。根据 O 抗原，副溶血性弧菌分为 14 个血清群。在血清群中，弧菌又根据 K 抗原分为 61 个血清型。副溶血性弧菌的抗原图谱仅针对从人类中分离的菌株而制定。

副溶血性弧菌的致病性与其合成溶血素的能力有关，而溶血素具有肠毒性。后者采用神奈川法检测。其本质在于，对人类致病的副溶血性弧菌在含有 7% NaCl 的血琼脂上可引起明显溶血。在含有低于 5% NaCl 的血琼脂上，许多副溶血性弧菌菌株可引起溶血，而在含有 7% NaCl 的血琼脂上，只有具有肠致病性的菌株才会引起溶血。副溶血性弧菌分布于日本、里海、黑海和其他海域的沿岸。它可导致食源性毒性感染和痢疾样疾病。食用感染副溶血性弧菌的生的或半生的海鲜（海鱼、牡蛎、甲壳类动物等）会感染。

在上述八种非霍乱弧菌中，对人类致病性最强的是创伤弧菌，该弧菌于1976年首次被描述为贝内克氏创伤弧菌，后于1980年重新归类为创伤弧菌。该弧菌常见于海水及其栖息生物中，可导致多种人类疾病。海洋来源和临床来源的创伤弧菌菌株在表型和基因上均无差异。

创伤弧菌引起的伤口感染进展迅速，导致肿瘤形成，随后组织坏死，伴有发烧、发冷，有时伴有剧烈疼痛，在某些情况下需要截肢。

已发现创伤弧菌能产生外毒素。动物实验表明，该病原体可导致严重的局部损伤，并伴有水肿、组织坏死，最终导致死亡。外毒素在该疾病发病机制中的作用尚在研究中。

除了伤口感染外，创伤弧菌还可能导致溺水者患肺炎，以及女性接触海水后患子宫内膜炎。创伤弧菌最严重的感染形式是食用生牡蛎（也可能是其他海洋动物）引起的原发性败血症。这种疾病发展非常迅速：患者会出现不适、发烧、发冷和虚脱，然后出现严重的低血压，这是死亡的主要原因（死亡率约为50%）。

河流弧菌（V. fluvialis）于1981年首次被描述为一种胃肠炎病原菌。它属于一类非霍乱致病性弧菌亚群，这些弧菌具有精氨酸二水解酶，但不具有鸟氨酸和赖氨酸脱羧酶（例如，河流弧菌（V. fluvialis）、弗尼斯弧菌（V. furnissii）和达姆塞拉弧菌（V. damsela），即表型上与气单胞菌相似）。河流弧菌是胃肠炎的常见病原体，可伴有严重呕吐、腹泻、腹痛、发热以及重度或中度脱水。其主要致病因素是肠毒素。

霍乱流行病学

传染源主要只有人——霍乱患者或霍乱弧菌携带者以及被它们污染的水。自然界中没有动物会感染霍乱。传染途径是粪口传播。传染途径：a) 主要途径——通过饮用水、洗浴水和家庭用水；b) 家庭接触；c) 通过食物。所有主要的霍乱疫情和大流行都与水有关。霍乱弧菌具有适应机制，确保其种群在人体内和某些开放水体生态系统中生存。霍乱弧菌引起的严重腹泻会导致肠道内竞争细菌的清除，并导致病原体在环境中广泛传播，主要是在废水和被倾倒的开放水体中。霍乱患者排出的病原体数量巨大——每毫升粪便中含有1亿至10亿个霍乱弧菌，而霍乱弧菌携带者每毫升粪便中排出10万至10万个霍乱弧菌，感染剂量约为100万个。霍乱弧菌在健康携带者体内的排泄时间为7至42天，在康复者体内的排泄时间为7至10天。更长时间的排泄极为罕见。

霍乱的一个特点是，霍乱爆发后通常不会留下长期病原体，也不会形成稳定的地方性疫源地。然而，正如上文所述，由于开放水体受到含有大量有机物、清洁剂和食盐的废水的污染，在夏季，霍乱弧菌不仅能够在其中存活很长时间，甚至还会大量繁殖。

具有重要流行病学意义的是，01组霍乱弧菌（无论产毒还是非产毒）均可在各种水生生态系统中以未培养形式长期存活。利用聚合酶链式反应技术，在独联体多个霍乱流行区的多个水体中，在细菌学研究中检测出了霍乱弧菌未培养形式的vct基因，结果呈阴性。

埃尔托尔霍乱弧菌的流行中心是印度尼西亚，这一第七次大流行的元凶从那里出现被认为与印度尼西亚独立后扩大与外界的经济联系有关，而亚洲、非洲和美洲各国对霍乱缺乏免疫力以及各种社会动荡，决定性地影响了疫情特别是第二波疫情的持续时间和迅猛发展。

发生霍乱时，采取一系列防疫措施，其中最主要和最关键的措施是积极、及时发现和隔离（住院、治疗）急性和非典型霍乱患者以及健康的弧菌携带者；采取措施防止可能的感染途径；特别注意供水（饮用水氯化处理），遵守食品企业、儿童机构、公共场所的卫生条件；对开放水域进行包括细菌学在内的严格控制，对人群进行免疫接种等。

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霍乱症状

霍乱的潜伏期从几小时到六天不等，最常见的是2-3天。霍乱弧菌进入小肠腔后，由于其移动性和对黏膜的趋化性，会直接进入黏液。为了穿透黏液，弧菌会产生多种酶：神经氨酸酶、黏蛋白酶、蛋白酶和卵磷脂酶，这些酶会破坏黏液中的物质，并促进弧菌向上皮细胞移动。通过粘附，弧菌附着在上皮的糖萼上，失去移动能力后开始大量繁殖，在小肠微绒毛中定植（见彩色插图，图101.2），同时产生大量的外毒素——霍乱原。霍乱原分子会与单唾液酸神经节苷脂Gni结合！并穿透细胞膜，激活腺苷酸环化酶系统，积聚的cAMP导致肠细胞分泌过多液体，阳离子和阴离子Na、HCO、Kl、Cl，从而导致霍乱腹泻、身体脱水和盐分降低。霍乱有三种类型：

• 一种剧烈的严重脱水性腹泻病，导致患者在数小时内死亡；
• 病程较轻，或腹泻不伴脱水；
• 无症状病程（携带弧菌）。

霍乱重症患者会出现腹泻，排便次数增多，粪便量增多，呈水样，失去粪便气味，呈米汤状（一种浑浊的液体，其中含有黏液残留物和漂浮的上皮细胞）。随后出现令人虚弱的呕吐，首先是肠内容物，然后呕吐物呈米汤状。患者体温降至正常以下，皮肤发青、起皱、冰冷——霍乱患者会出现寒冷症状。由于脱水，血液变稠，出现紫绀，缺氧，肾功能急剧受损，出现抽搐，患者失去意识并死亡。第七次霍乱大流行期间的死亡率在发达国家为1.5%，在发展中国家高达50%。

感染后免疫力强且持久，且很少复发。免疫力具有抗毒素和抗菌作用，由抗体（抗毒素比抗菌抗体持续时间更长）、免疫记忆细胞和吞噬细胞产生。

霍乱的实验室诊断

诊断霍乱的主要和决定性方法是细菌学检查。患者的检查材料是粪便和呕吐物；粪便中用于检查是否携带弧菌；霍乱死者需取结扎的小肠和胆囊进行检查；外部环境物质，例如露天水库的水和废水，通常用于检查。

进行细菌学研究时，必须满足以下三个条件：

• 尽快从患者体内播散病原体（霍乱弧菌在粪便中存活时间较短）；
• 盛放材料的容器不应使用化学品消毒，也不应含有痕量化学品，因为霍乱弧菌对化学品非常敏感；
• 消除污染和感染他人的可能性。

培养物分离方案如下：接种于PV培养基，同时接种于碱性MPA培养基或任何选择性培养基（TCBS最佳）。6小时后，检查PV培养基上形成的薄膜，如有必要，将其转移到第二个PV培养基中（在这种情况下，霍乱弧菌的接种率增加10%）。然后，从PV培养基转移到碱性MPA培养基中。将可疑菌落（玻璃状透明）转移以获得纯培养物，通过形态学、培养特性、生化特性和运动性进行鉴定，最后使用诊断性凝集血清O型、OR型、Inaba型和Ogawa型以及噬菌体（HDF）进行分型。已提出了多种加速诊断方法，其中最佳方法是发光血清学法。该方法可在1.5-2小时内直接在测试材料中检测出霍乱弧菌（或在两个含有1% PV的试管中进行初步培养，并在其中一个试管中加入霍乱噬菌体）。为了加速霍乱弧菌的检测，下诺夫哥罗德霍乱弧菌研究所 (IEM) 提出了一套纸质指示片，其中包含 13 种生化检测试剂（氧化酶、吲哚、尿素酶、乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖、阿拉伯糖、甘露醇、肌醇、精氨酸、鸟氨酸、赖氨酸），用于区分霍乱弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属、假单胞菌属、丛毛单胞菌属以及肠杆菌科。为了快速检测粪便和环境物体中的霍乱弧菌，可以使用带有诊断抗体的 RPGA 法。为了检测环境物体中未培养的霍乱弧菌，仅使用聚合酶链式反应 (PCR) 方法。

如果分离出非Ol群霍乱弧菌，应使用其他血清群的相应凝集血清进行分型。从腹泻患者（包括霍乱样腹泻）中分离非Ol群霍乱弧菌，需采取与Ol群霍乱弧菌分离相同的防疫措施。如有必要，可使用PCR方法检测此类弧菌中是否存在致病基因ctxAB、tcp、toxR和hap。

霍乱血清学诊断具有辅助性。为此，可以使用凝集反应，但最好测定杀弧菌抗体或抗毒素的滴度（霍乱抗体可通过酶联免疫吸附测定或免疫荧光法测定）。

非霍乱致病弧菌的实验室诊断

诊断非霍乱致病弧菌引起的疾病的主要方法是使用选择性培养基（例如 TCBS、MacConkey 等）进行细菌学诊断。根据该属细菌的关键特征确定分离培养物属于弧菌属。

霍乱的治疗

霍乱患者的治疗应主要包括补液和恢复正常的水盐代谢。为此，建议使用以下成分的生理盐水：氯化钠 - 3.5 克；碳酸氢钠 - 2.5 克；氯化钾 - 1.5 克；葡萄糖 - 20.0 克/升水。这种以病原学为基础的治疗，结合合理的抗生素疗法，可将霍乱的死亡率降低至 1% 或更低。

霍乱的具体预防

为了建立人工免疫力，提出了一种霍乱疫苗，包括由灭活的稻叶（Inaba）和小川（Ogawa）菌株制成的疫苗；一种用于皮下注射的霍乱类毒素疫苗；以及一种肠内化学二价疫苗，该疫苗由类毒素和稻叶（Inaba）和小川（Ogawa）血清型的体细胞抗原组成，因为不会形成交叉免疫。然而，接种后免疫力持续时间不超过6-8个月，因此仅根据流行病学指征进行接种。抗生素预防在霍乱疫源地已被证明效果良好，尤其是四环素，因为霍乱弧菌对其高度敏感。其他对霍乱弧菌有效的抗生素也可用于相同目的。