泌尿科免疫学研究

给泌尿科患者开具免疫图谱检查，意味着主治医生怀疑患者免疫系统存在疾病。反复发作的细菌、病毒、真菌感染、过敏症状以及全身性疾病都可能是这些疾病的征兆，这些疾病的特征包括多种综合征（感染性、肿瘤性、过敏性、自身免疫性、淋巴增生性）。一位患者可能同时患有几种综合征。例如，慢性传染病（感染综合征）可导致免疫缺陷，而免疫缺陷又可表现为易患传染病和肿瘤疾病（肿瘤综合征）。感染易感性可能发生在继发性免疫缺陷的背景下，而继发性免疫缺陷是由淋巴增生性疾病（例如白血病）引起的。免疫系统的病理变化主要分为三类：

• 免疫系统的某个环节的数量或功能缺陷，导致免疫缺陷状态的发展;
• 免疫系统识别抗原的障碍，导致自身免疫过程的发展；
• 免疫反应过度或“变态”，表现为过敏性疾病的发展。

免疫诊断方法分为筛查（一级检测）和明确（二级检测）。前者用于记录免疫系统的异常，后者用于确定其发生机制，以便进一步进行免疫矫正。

B细胞免疫

筛选方法

• 使用针对B细胞抗原（CD19、CD20，其中CD代表分化簇）的单克隆抗体，通过免疫荧光法或流式细胞荧光法测定B淋巴细胞的相对数量和绝对数量。成人B淋巴细胞的正常含量为白细胞总数的8-19%，即190-380个细胞/微升。在急性和慢性细菌及真菌感染、慢性肝病、系统性结缔组织病、慢性淋巴细胞白血病和骨髓瘤中，B淋巴细胞含量会增高。
• 通过简单的径向免疫扩散法、浊度法或涡轮测定法、放射免疫分析法或酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定非特异性免疫球蛋白（F、M、G、E）的浓度。成人标准：免疫球蛋白（Ig）A 0.9-4.5克/升。IgM 03-3.7克/升。IgG 8.0-17克/升。在B淋巴细胞含量增加的相同病理条件下，免疫球蛋白浓度会升高。在先天性低丙种球蛋白血症、免疫系统肿瘤、脾脏切除、蛋白质丢失、肾脏或肠道疾病、细胞抑制剂和免疫抑制剂治疗中，免疫球蛋白浓度会降低。

澄清方法

• 通过在聚乙二醇中进行选择性沉淀，然后进行分光光度密度测试来测定血液中的循环免疫复合物（正常值为80-20 U）。循环免疫复合物增高通常见于急性细菌、真菌、病毒感染、自身免疫性疾病、免疫复合物疾病、血清病、3型过敏反应；
• 通过放射免疫扩散或 ELISA 方法确定血液中与细菌和病毒抗原相关的特定免疫球蛋白、自身免疫性疾病中的脱氧核糖核酸 (DNA)、检测抗精子 (自身免疫性不育症) 和抗肾抗体 (肾盂肾炎和肾小球肾炎)。
• 精子中抗精子抗体测定[MAR试验（混合抗球蛋白反应）]，正常-阴性结果。
• 测定尿液中免疫球蛋白的浓度，以鉴别诊断肾盂肾炎和肾小球肾炎（蛋白尿的选择性）。
• 采用放射免疫扩散法或ELISA测定前列腺液中的IgE含量，以诊断过敏性前列腺炎。
• 研究B淋巴细胞母细胞转化对B细胞有丝分裂原（商陆有丝分裂原在T淋巴细胞存在下刺激B淋巴细胞母细胞转化反应）的反应，其标准值为95-100％。

T细胞免疫连接

筛选方法

• 通过免疫荧光反应或流式细胞荧光法，使用单克隆抗CD3抗体测定成熟CD3 T淋巴细胞的相对数量和绝对数量。成人正常值为58-76%，即1100-1700个细胞/μl。T淋巴细胞数量减少是细胞免疫功能低下的指标。这在某些继发性和原发性免疫缺陷中很常见（慢性细菌和病毒感染：结核病、获得性免疫缺陷综合征、恶性肿瘤、慢性肾衰竭、损伤、应激、衰老、营养不良、细胞抑制剂治疗、电离辐射暴露）。T淋巴细胞数量的增加通常发生在免疫功能亢进或淋巴增生性疾病的背景下。炎症时，T淋巴细胞数量先增加后减少。T淋巴细胞数量未减少则提示存在慢性炎症过程。
• 淋巴细胞亚群的评估。
  • 测定T辅助细胞（抗CD4抗体）的数量。正常值为36-55%，即400-1100个细胞/微升。自身免疫性疾病、瓦尔登斯特伦病以及抗移植免疫激活会导致T辅助细胞数量增加；慢性细菌、病毒、原虫感染、结核病、获得性免疫缺陷综合征、恶性肿瘤、烧伤、损伤、营养不良、衰老、细胞抑制剂治疗以及电离辐射暴露会导致T辅助细胞数量减少。
  • 测定T抑制细胞（抗CD4抗体）的数量。正常情况下，T抑制细胞数量为17-37%，即300-700个细胞/μl。在T辅助细胞数量减少的情况下，T抑制细胞数量会增加；在T辅助细胞数量增加的情况下，T抑制细胞数量会减少。
  • 免疫调节指数CD4/CD8正常值为1.5-2.5。免疫调节过度（超过2.5，为过敏和自身免疫性疾病）；免疫调节减退（低于1.0，为慢性感染倾向）。炎症初期，免疫调节指数升高；消退后，则恢复正常。

澄清方法

• 测定自然杀伤细胞（NK细胞）的数量——抗CD16和抗CD56抗体。CD16淋巴细胞的正常值为6-26%，CD56为9-19%。移植排斥反应会导致NK细胞数量增加，而病毒感染、癌症、原发性和继发性免疫缺陷、烧伤、损伤和应激、细胞抑制剂治疗以及电离辐射暴露会导致NK细胞数量减少。
• 测定具有白细胞介素-2受体（活化标志物）的T淋巴细胞——抗CD25抗体的数量。正常值为10-15%。在过敏性疾病、移植排斥反应、原发性感染急性期对胸腺依赖性抗原的应答中观察到T淋巴细胞数量增加，而在NK细胞数量减少的疾病中观察到T淋巴细胞数量减少。
• 激活标记物-II类组织相容性分子HLA-DR的表达研究。在炎症过程中，以及丙型肝炎、乳糜泻、梅毒、急性呼吸道疾病患者中，其表达增加。
• 淋巴细胞凋亡的评估。可以通过淋巴细胞表面Fas受体（CD95）的表达以及线粒体中bd-2原癌基因的表达来粗略地判断淋巴细胞凋亡的准备程度。淋巴细胞凋亡的评估方法是用两种荧光染料处理淋巴细胞：碘化丙啶（可与DNA片段结合）和膜联蛋白Y（可与磷脂酰丝氨酸结合，磷脂酰丝氨酸在细胞凋亡开始时出现在细胞膜上）。使用流式细胞荧光仪评估结果。结果根据不同染料染色的细胞比例计算得出。未染色的细胞为活细胞，仅与膜联蛋白Y结合的细胞为凋亡的早期表现，同时与碘化丙啶和膜联蛋白Y结合的细胞为凋亡的晚期表现，仅与碘化丙啶染色则为细胞坏死。
• 体外评估T淋巴细胞增殖。
  • 细胞胚形成的变化——淋巴细胞胚转化反应。将白细胞与任何植物来源的有丝分裂原（凝集素）一起孵育。植物血凝素通常用于72小时，然后取样、染色并计数胚细胞数量！刺激指数是实验组（含植物血凝素的培养物）中转化细胞的百分比与对照组（不含植物血凝素的培养物）中转化细胞的百分比之比。淋巴细胞胚转化反应可以通过在培养细胞中加入放射性标记物（ZN-胸腺嘧啶）来评估，因为DNA合成在细胞分裂过程中会增加。在与感染、癌症、肾衰竭和外科手术相关的原发性和继发性免疫缺陷中，增殖反应都会发生紊乱。
  • 在这些研究中，评估了活化标志物（CD25、转铁蛋白受体CD71）以及主要组织相容性复合体II类HLA-DR分子的表达，这些分子在静息T淋巴细胞中几乎不存在。用植物血凝素刺激T淋巴细胞，3天后，通过直接或间接免疫荧光反应、流式细胞荧光法，使用分离受体的单克隆抗体分析活化标志物的表达。
  • 使用放射免疫分析或 ELISA 法测量活化 T 淋巴细胞合成的介质（白细胞介素 (IL) 2、IL-4、IL-5、IL-6、γ-干扰素等）的量。尤其重要的是评估活化培养上清液和细胞内作为 Th1 和 Th2 细胞标志物的 γ-干扰素和 IL-4 的浓度。如果可能，通过生产细胞中的基质核糖核酸水平和相应细胞因子受体的表达强度来确定相应细胞因子的基因表达情况会很有帮助。
    
• 淋巴细胞迁移抑制反应。致敏T淋巴细胞与抗原反应，分泌淋巴因子，包括抑制淋巴细胞迁移的因子。当有丝分裂原被引入细胞培养物中时，会观察到这种抑制现象。评估抑制程度可以判断淋巴细胞分泌细胞因子的能力。通常，迁移频率取决于具体的有丝分裂原，为20-80%。
• 评估NK细胞的细胞毒性。测定自然杀伤细胞杀伤K-562红髓系靶细胞的能力。如果评估抗体依赖性细胞毒性，则使用包被IgG抗体的靶细胞。靶细胞用3H-尿苷标记，并与效应细胞孵育。通过放射性标记物释放到溶液中来评估靶细胞的死亡情况。恶性肿瘤的细胞毒性会降低。在某些情况下，当需要预测白细胞介素治疗的有效性时，需要评估NK细胞与某些细胞因子孵育期间的细胞毒性。

吞噬细胞功能研究

筛选方法

研究吞噬细胞对微生物细胞的吸收强度（乳胶颗粒的吞噬作用、葡萄球菌、大肠杆菌或从患者体内分离的微生物的测试培养）。通过离心肝素化血液，分离出白细胞悬液，加入IV血型血清进行调理（调理素是增强吞噬作用的蛋白质）。将微生物悬液稀释后与白细胞混合，孵育120分钟，并分别在孵育开始后30、90、120分钟取样进行分析。对收集的白细胞悬液进行涂片检查。测定以下吞噬指标：

• 吞噬指数-孵育 30 分钟和 120 分钟内进入吞噬作用的细胞百分比；吞噬指数（30）的标准值为 94%，吞噬指数（120）的标准值为 92%；
• 吞噬数——位于细胞内的细菌平均数量；吞噬数（30）的标准值为11%，吞噬数（120）为9.8%；
• 吞噬数量系数-吞噬数量（30）与吞噬数量（120）的比率；通常为 1.16；
• 中性粒细胞杀菌指数——吞噬细胞内杀死的微生物数量与吸收的微生物总数的比例；通常为 66%。

澄清方法

• 硝基四唑蓝 (NBT) 试验中吞噬细胞杀菌能力的研究 - NBT 试验。将黄色硝基四唑蓝染料添加到白细胞中。当中性粒细胞吸收染料时，在氧自由基的作用下发生还原过程，从而呈现蓝色。该反应在 96 孔平底板中进行。将 Hanks 溶液（自发性 NBT）添加到含有 NBT 和白细胞混合物的前三个孔中，并将乳胶颗粒添加到第二个孔中；将混合物在 37°C 下孵育 25 分钟。在读数仪上以 540 nm 读取结果，并以任意单位表示。计算刺激系数 (K _st )，等于受刺激孔的光密度与未受刺激孔的平均光密度之比。在健康人群中，NBT_自发= 90 ± 45 CU，NBT_刺激= 140 ± 60 CU。 Kst = _1.78 ±0.36。
• 粘附分子研究。流式细胞荧光法用于测定表面抗原CD11a/CD18、CD11b/CD18、CD11c/CD18的表达。粘附功能受损的免疫缺陷表现为反复感染、伤口愈合缓慢以及感染灶内无脓液。

补体系统的研究

筛选方法

补体溶血活性测定是研究补体激活的经典途径。将不同稀释度的病人和健康人血清加入到抗体包被的红细胞中。溶血活性单位是50%红细胞被破坏时血清稀释度的倒数。溶血程度通过光度法测定血红蛋白释放到溶液中来评估。在伴有肾脏损害的系统性红斑狼疮、急性肾小球肾炎、联合免疫缺陷、重症肌无力、病毒性肝炎、淋巴瘤、阻塞性黄疸增多、桥本甲状腺炎、风湿病、类风湿性关节炎、结节性动脉周围炎、皮肌炎、心肌梗死、溃疡性结肠炎、赖特综合征和痛风中，补体溶血活性降低。

澄清方法

• 补体成分测定。定量测定采用放射状免疫扩散法和浊度法。
  除非补体成分的抗原特性发生改变，否则该研究不具有参考价值。
• 已证实补体中的Clq成分能增强吞噬作用并介导细胞毒作用。Clq的减少见于免疫复合物疾病、系统性红斑狼疮、化脓性感染和肿瘤。
• C3成分参与激活经典补体途径和替代补体途径。其浓度降低与慢性细菌和真菌感染、循环或组织免疫复合物的存在有关。
• C4成分参与经典途径的激活。其浓度降低与免疫复合物激活补体作用的延长以及控制经典补体途径激活的C1抑制剂浓度降低有关。系统性红斑狼疮患者会出现C4缺乏，而肾脏疾病、移植排斥、急性炎症和胃肠道疾病患者会出现C4增高。
• C5a是C5分子的一个小片段，在补体系统激活后从C5分子中分离出来。在炎症、脓毒症、过敏性疾病和过敏性疾病中，其浓度会增加。
• Cl-抑制剂是一种多功能因子。它控制补体成分C1的活化，抑制激肽释放酶、纤溶酶以及活化的Hageman因子、Cls和Or蛋白酶的活性。C1-抑制剂缺乏会导致血管性水肿。
• 补体功能研究。将待测血清加入缺乏任何补体成分的标准血清中，测定补体的溶血活性。如果溶血活性未恢复正常，则认为待测血清中该补体成分的活性降低。

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ]